實驗內容

康生1號戒毒口服液戒毒藥效學和急性毒性試驗

目的:初步觀察康生1號戒毒口服液對大白鼠和小白鼠嗎啡依賴性戒斷癥狀的影晌。

方法：給大白鼠和小白鼠用劑量遞增法，皮下注射七天，形成嗎啡依賴模型。動物分為嗎啡依賴性病模對照組（簡稱病模組）、病模+康生1號戒毒口服液高、中、低（含生藥75g/kg、37.5 g/kg和18.75g/kg，分別相當于臨床用量的5倍、2.5倍和1.25倍）三個劑量組和病模+可樂定陽性對照組，并設一個不造模的正常對照組.共計6組。造模第5天開始，同時灌胃給藥，每天二次，連續三天。第八天，各組動物均腹腔注射納絡酮催癮，記錄動物的戒斷癥狀（大白鼠給納絡酮催癮后按戒斷癥狀評分和稱體重計算失重；小白鼠則計算納絡酮催癮后跳躍次數/10分鐘）。用SPSS（10.0）方差分析組間差異的顯著性。

結果:康生1號戒毒三個劑量組，均能明顯的減輕大白鼠戒斷癥狀評分，但對小白鼠催癮后的跳躍次數/10分鐘無明顯影響。大白鼠急性毒灌胃一日耐受大于50ml（含生藥142.5g）·kg-1 。

結論：康生1號戒毒口服液灌胃給藥，三個劑量均能明顯的抑制大白鼠嗎啡成癮的戒斷癥狀 。該藥大白鼠灌胃給藥的急性毒性很小。

當今社會上吸毒現象日趨嚴重，吸毒中仍以對片類（嗎啡、海洛英等）成癮者居多，國內外普遍采用美沙酮替代療法，但由于美沙酮本身是麻醉性成癮藥物，且有一定毒副作用，是其不足。

近年來，我國的廣大醫藥科研人員，就中藥戒毒藥進行了許多探索和開發，并已有了一些中藥戒毒藥用于戒毒，也顯露出一定的效果，但尚缺乏有突破性藥物出現。

康生1號戒毒口服液是臨床試用效果良好的戒毒藥，福建省泉州洲際生物工程有限公司擬于開發的中藥戒毒藥，我們按藥品研究的要求，對該樣品進行了戒毒作用的初步藥效學試驗和急性毒性試驗，現將試驗結果報告如下：

一、康生1號對嗎啡成癮大白鼠戒斷癥狀的影響:

（一）、實驗目的：初步觀察康生1號戒毒口服液對嗎啡成癮大白鼠戒斷癥狀的影響。

（二）、實驗材料：

1、實驗動物：大白鼠，SD品系，雄性，160~170g,上海斯克萊實驗動物責任公司提供，合格證：0003288。

2、測試藥品：康生1號戒毒口服液，流浸膏，含生藥4．278 g/ml, 實驗時用蒸餾水配成所需的濃度。福建省泉州市洲際生物工程有限公司提供。批號：040419。

3、其它試劑：

（1）、鹽酸嗎啡注射液，10mg/1ml,沈陽制藥廠生產，批號 20010406。

（2）、鹽酸納絡酮（粉），100mg/支，Sigma公司出品。

（3）、鹽酸可樂定片，0.075mg/片,丹陽市藥業責任公司，批號 20040304。 

（三）、試驗方法：

1、大白鼠嗎啡依賴性模型的建立： 試驗用大白鼠50只, 雄性，160~170g, 分8只為一組，共6組，除正常對照組外，其余5組，給皮下注射（sc）鹽酸嗎啡，每日二次(8:00am:6:00pm)，首日劑量為20mg/kg，以后每日遞增20mg/kg，至第5天，鹽酸嗎啡劑量達100mg/kg, 以該劑量維持2天，以形成大白鼠嗎啡依賴性模型。正常對照組用生理鹽水皮下注射對照。

2、分組和劑量：試驗設正常對照組、嗎啡依賴性病模組（簡稱病模組）、病模+康生1號戒毒口服液高、中、低三個劑量組和病模+可樂定陽性對照組，共計6組。造模第5天開始灌胃給藥，康生1號戒毒口服液三個劑量分別為每日生藥75.0g/kg、37.5 g/kg和18.75g/kg(分別相當于臨床用量的5倍、2.5倍和1.25倍) ，分二次灌胃給藥，灌胃容量為1ml/100g bw. 正常對照組和病模組給等量常水灌胃對照?？蓸范栃詫φ战M,僅在給納絡酮催癮測定時，腹腔注射（ip）給藥一次。

3、催癮試驗和藥效觀察：除正常對照組外，各組動物均于第8天上午再給皮下注射（sc）鹽酸嗎啡100mg/kg一次，2小時后灌胃給藥一次，給藥后1小時，稱重，各組動物腹腔注射（ip）鹽酸納絡酮5mg/kg.bw催癮。觀察記錄各項戒斷癥狀，并按柳田知司記分法評分：異常姿勢2分。高度激惹、觸碰激惹2分、靠近激惹1分。咬牙，間斷性0.5分、連續性1分。以上行為每15分鐘評一次，共4次。流淚4分。軟便4分、不成形8分。流涎輕度1分、明顯2分。以上植物神經系統癥狀60分鐘內評分一次，計算每鼠總累積分。同時稱量催促戒斷后1、24、48、72和96小時大白鼠體重，與催癮前體重比較，計算其體重喪失情況。數據用表示，SPSS（10.0）方差分析，檢驗組間差異的顯著性。

（四）、結果：

實驗結果證明，給大白鼠皮下注射嗎啡，造成嗎啡依賴性病模后，動物體重明顯減輕。給鹽酸納絡酮5mg/kg.bw腹腔注射（ip）催癮，注射1~2分鐘后，動物開始出現異常姿勢、激惹、咬牙、流涎和腹瀉等戒斷癥狀。給康生1號戒毒口服液三個劑量組動物的戒斷癥狀明顯較輕。（結果見表1~1和表1~2）

表1~1康生1號對嗎啡成癮大白鼠戒斷癥狀的影晌（n=8,）

與正常對照組比較，P〈0.01；與病模組比較，* P〉0.05、 *** P〈0.01。

表1~2  催癮后各組大白鼠體重變化比較（n=8,）

與正常對照組比較，P〉0.05 、P〈0.01；與病模組比較，*P〉0.05，** P〈0.05。

（五）、討論與小結：

用大鼠催促戒斷癥狀評分方法，來評價針對阿片類戒毒藥的療效作用，仍是目前國內外常用的評定方法。

本實驗用遞增法，給大白鼠皮下注射（sc）鹽酸嗎啡七天，造成嗎啡依賴性模型，動物呈現出懶散、毛松、食欲下降和體重減輕等癥狀。給動物腹腔注射（ip）鹽酸納絡酮5mg/kg.bw催癮后，動物開始出現異常姿勢、激惹、咬牙、流涎和腹瀉等戒斷癥狀，伴有體重明顯減輕。給康生1號戒毒口服液灌胃的三個劑量組，動物戒斷癥狀明顯減輕，其中，康生1號戒毒口服液18.75g/kg/天×3天劑量組的作用尤其明顯，與可樂定陽性對照組作用相似，且能減輕體重的下降。          

實驗結果也表明，劑量大小與藥效強度關系不明顯。原因尚需進一步實驗查明。

二、康生1號對嗎啡成癮小白鼠戒斷癥狀的影響：

（一）、實驗目的：觀察康生1號對嗎啡成癮小白鼠戒斷癥狀的影響。

（二）、實驗材料：

1、實驗動物：小白鼠，昆明種，雄性，18~22g,福建醫科大學動物實驗中心供應。

2、測驗藥樣：康生1號戒毒口服液，流浸膏，含生藥4．278 g/ml, 實驗時用蒸餾水配成所需的濃度。福建省泉州市洲際生物工程有限公司提供。批號：040419。

3、其它試劑：

（1）、鹽酸嗎啡注射液，10mg/1ml,沈陽制藥廠生產，批號 20010406。

（2）、鹽酸納絡酮注射液，0﹒4mg/ml,益僑（湖南）制藥有限公司生產，批號 20010102。

（3）、鹽酸可樂定片，0.075mg/片,丹陽市藥業責任公司，批號 20040304。

（三）、試驗方法：

1、小白鼠嗎啡依賴性模型的建立： 試驗用小白60 只，雄性，18~20g, 分10只為一組，共6組，除正常對照組外，其余5組，給皮下注射（sc）鹽酸嗎啡，每日二次(8:00am:6:00pm)，從50mg/kg開始每日遞增10mg,至第6天達到100mg/kg,維持此劑量，繼續給藥至第8天上午再給藥1次后，進行催癮試驗。

2、分組和劑量：試驗設正常對照組、嗎啡依賴病模組（簡稱病模組）、病模+康生1號戒毒口服液高、中、低三個劑量組和病模+可樂定陽性對照組，共計6組。造模第5天開始灌胃給藥，康生1號戒毒口服液三個劑量分別為生藥75g、37.5 g和18.75g(相當于臨床用量的5倍、2.5倍和1.25倍) ，分二次灌胃給藥，灌胃容量為0.3ml/10g bw. 正常對照組和病模組給等量常水灌胃對照?？蓸范栃詫φ战M,僅在給納絡酮催癮測定時腹腔注射（ip）給藥一次。

3、驗和藥效觀察：除正常對照組外，各組動物均于第8天上午再給皮下注射（sc）鹽酸嗎啡100mg/kg一次，2小時后灌胃給藥一次，給藥后1小時，稱重，各組腹腔注射（ip）鹽酸納絡酮5mg/kg.bw催癮,立即將小白鼠放入一個直徑750px,高875px的玻璃圓筒內，觀察10min內小白鼠跳躍反應，記錄跳躍動物數、計算每組跳躍百分率（每組跳躍動物數/每組測定動物數）和跳躍次數/10min。數據用表示，SPSS 10.0檢驗組間差異的顯著性。

(四)、結果：

表2~1 康生1號對嗎啡成癮小白鼠戒斷癥狀的影晌（n=10,）

　　與正常對照組比較， P〈0.01；與病模組比較，* P〉0.05。

（五）、討論與小結：

實驗結果證明，嗎啡依賴性病模組小鼠，給鹽酸納絡酮5mg/kg.bw腹腔注射（ip）催癮后，正常對照組小鼠無跳躍反應，而嗎啡依賴性病模組小鼠，跳躍反應為百分之一百，表明小鼠嗎啡依賴性病理模型造模成功?？蓸范ǎ?.015mg/kg,ip）陽性對照組小鼠跳躍次數/10min比病模組明顯減少，抑制率為39.2%、P〈0.05，而給康生1號戒毒口服液三個劑量組催癮后，小鼠跳躍次數/10min與病模對照組比較雖有減少，但差異無統計學顯著意義。

三、康生1號戒毒口服液急性毒性試驗（耐受量、 MTD測定）

（一）、試驗目的：康生1號戒毒口服液經預試，其灌胃給藥的毒性小，無法測出LD50，改做一日耐受量（MTD）測定，以反應該藥的毒性。

（二）、試驗材料：

1、實驗動物：大白鼠，SD品種，240~270g，雄性，40只，上海斯克萊實驗動物責任公司提供，合格證：0003288。

2、試驗藥品：，康生1號戒毒口服液，流浸膏，含生藥4．278 g/ml,福建省泉州洲際生物工程有限公司提供。批號：040419。實驗時用蒸餾水配制成可通過灌胃器灌胃給藥的濃度（合生藥2.85g/ml）。

（三）、實驗方法：

經預試，康生1號戒毒口服液毒性小，一次灌胃給藥無法測定LD50，改做一日耐受量（MTD）測定。

正式試驗用白鼠40只，SD品種，雄性，體重240~270g。實驗前禁食給水16小時，稱重，分20只/組，一組為給藥組，按高劑量：即給藥物大濃度（生藥2.85g/ml），大容積（2.5ml/100g . bw）灌胃給藥，每6小時1次，連續2次。另一組為正常對照組，給常水2.5ml/100g . bw灌胃對照。觀察給藥后動物的中毒癥狀和7天內的死亡情況。

（四）、實驗結果：

給藥后約10分鐘，大白鼠出現喜臥少動、行走緩慢的情況，持續2～3小時，4～5小時后出現褐色溏便（與藥物顏色相似），污染肛周和尾部。被毛較松，呼吸較慢，膚色稍暗，鼻、眼、口腔無異常分泌物，無抽搐，光反射正常，第2次給藥后上述癥狀更為明顯。第2天動物全部恢愎正常，7天內未見動物中毒死亡，1周后稱重，給藥組大白鼠體重增重37.4±16.0g，正常對照組增重36.6±8.8g，二組動物體重增長屬正常范圍。

（五）、小結：

實驗結果證明，給大白鼠灌胃（ig）康生1號戒毒口服液高劑量：即藥物的濃度（生藥2.85g/ml），容積（2.5ml/100g . bw），一日二次，動物出現中樞神經糸統的鎮靜作用，溏便等反應，第2天動物全部恢愎正常，7天內未見動物中毒死亡，體重增長正常，計算出一日耐受量大于50ml（含生藥142.5g）·kg-1。表明康生1號戒毒口服液的急性毒性小。